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Lo staffNo problem.....Son abituato con le MSA in composito da 300 bar
No problem.....Son abituato con le MSA in composito da 300 bar
anche tu subacqueo? che bello nel funclub usmc abbiamo anche una tasc force di sommozzatoriOriginariamente inviata da Red1497
No problem.....Son abituato con le MSA in composito da 300 bar
Poi a fare le cose di persona capendole x me è una gioia impareggiabileQuoto, sarebbe utile!
Ma che figata!! io feci una serie di studi del genere durante uno stage di qualche settimana in un centro di ricerca a bologna... in quarta liceo!!
Ora che studio economia la biologia (insieme alla fisica) mi manca molto
devo dire che è anche finita bene, era una procedura lunga e oggi era solo l'ultima fase di quick screening per testare se il clonaggio era ben riuscito
Quando riesci a clonare materiale usmc dimmelo che ti assumo io
Utente in attesa di verifica
La verità è che paolonix vuole clonarsi e fare la sua armata privata di reenactors (ma soprattutto avere qualcuno che biddi alle 2 di notte tutte le aste al posto suo)...
apparte la battuta carina, non si trattava di "clonaggio" di un organismo come te lo dicono in telvisione, era un'altro tipo di clonaggio, genicoLa verità è che paolonix vuole clonarsi e fare la sua armata privata di reenactors (ma soprattutto avere qualcuno che biddi alle 2 di notte tutte le aste al posto suo
pezzettino di dna umano inserito e amplificato in colture batteriche
cmq qua è OT, meglio andare nella mess hall x queste cose
Io finché parliamo di DNA, RNA, mRNA e tRNA posso colloquiare, dopodiché c'é l'abisso
bhe allora un po possiamo capirci, in pratica la procedura era la seguente:Io finché parliamo di DNA, RNA, mRNA e tRNA posso colloquiare, dopodiché c'é l'abisso
-prima fase lisaggio di una coltura cellulare di fibroblasti umani in una fiaschetta, prelievo, del lisato, trattamento con vari agenti chimici e varie centrifugazioni ed eliminazione del sovranatante per ottenere il pellets del totale degli RNA
-controllo tramite gel elettroforesi su agarosio per accertare la presenza degli RNA, quindi ovviamente ottieni bandeggi distinti degli RNA ribosomiali 28s 17s e 5s, e tracce opalescenti degli RNA messaggeri espressi in quel momento dalla cellula, oltre ai tRNA, small nuclear RNA e 4,5svedberg dei complessi di riconoscimento delle SRP.
-retrotrascrizione mediante enzima trascrittasi inversa degli RNA messaggeri in cDNA a doppio filamento
-amplificazione mediante PCR con primer specifici disegnati per il cDNA relativo al messaggero per la beta-actina umana (primer dotati di estremità EcoR1 restrizione compatibili)
-gel elettroforesi per testare la buona riuscita della amplificazione e la non presenza di amplificazioni parassita, recupero con bisturi dell'amplificato, risospensione per centrifuga
-preparazione dei plasmidi pBlueScript mediante taglio con enzima di restrizione EcoR1, stessa cosa per i cDNA per ottenere estremità sticky coesive
-gel elettroforesi con controllo per testare l'apertura del vettore plasmidico circolare
-legatura overnight dei plasmidi con gli inserti preparati
-preparazione di colture batteriche di ceppi E.Coli mutanti res- e rec- sincrone alla fase logaritmica precoce della crescità in batch
-trasformazione delle cellule competenti mediante una soluzione trasformante specifica per facilitare l'ingresso di tutti i vettori nelle cellule batteriche (compresi i vettori che si sono richiusi senza inserto)
-piastraggio su terreni selettivi con ampicillina per eliminare i batteri non trasformati (pbluescript porta il genere per la resistenza all'antibiotico ampicillina)
-crescita delle colonie ricombinanti overnight
-prelievo di una colonia controllo dotata di plasmide vuoto e di 3 colonie random trasformate (?) non c'era tempo materiale per fare lo screening mediante sonde marcate radioattivamente, screening per pcr, screening mediante metodo lacZ o altro quindi il quick screening è stato fatto per gel elettroforesi.
semplificato come una storiella di cappuccetto rosso, 1 settimana di lavoro eheheh
Utente in attesa di verifica
Bisogna avere una bella testa per fare un lavoro del genere. Non ci ho capito una H ma complimenti lo stesso!
PIù che altro bisogna sapere quello di cui si aprla, oltre che a una mente adeguata
Io conta son riuscito a capire metà delle cose che mi hai detto
