No problem.....Son abituato con le MSA in composito da 300 bar :prot:
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No problem.....Son abituato con le MSA in composito da 300 bar :prot:
anche tu subacqueo? che bello nel funclub usmc abbiamo anche una tasc force di sommozzatori :DQuote:
Originariamente inviata da Red1497
Poi a fare le cose di persona capendole x me è una gioia impareggiabile ;)Quote:
Originariamente inviata da Petro
devo dire che è anche finita bene, era una procedura lunga e oggi era solo l'ultima fase di quick screening per testare se il clonaggio era ben riuscito ;)
Quando riesci a clonare materiale usmc dimmelo che ti assumo io :D
La verità è che paolonix vuole clonarsi e fare la sua armata privata di reenactors (ma soprattutto avere qualcuno che biddi alle 2 di notte tutte le aste al posto suo :giggle: )...
apparte la battuta carina, non si trattava di "clonaggio" di un organismo come te lo dicono in telvisione, era un'altro tipo di clonaggio, genico :)Quote:
Originariamente inviata da Anelkiller
pezzettino di dna umano inserito e amplificato in colture batteriche ;)
cmq qua è OT, meglio andare nella mess hall x queste cose :)
Io finché parliamo di DNA, RNA, mRNA e tRNA posso colloquiare, dopodiché c'é l'abisso :giggle:
bhe allora un po possiamo capirci, in pratica la procedura era la seguente:Quote:
Originariamente inviata da Royal_Marine
-prima fase lisaggio di una coltura cellulare di fibroblasti umani in una fiaschetta, prelievo, del lisato, trattamento con vari agenti chimici e varie centrifugazioni ed eliminazione del sovranatante per ottenere il pellets del totale degli RNA
-controllo tramite gel elettroforesi su agarosio per accertare la presenza degli RNA, quindi ovviamente ottieni bandeggi distinti degli RNA ribosomiali 28s 17s e 5s, e tracce opalescenti degli RNA messaggeri espressi in quel momento dalla cellula, oltre ai tRNA, small nuclear RNA e 4,5svedberg dei complessi di riconoscimento delle SRP.
-retrotrascrizione mediante enzima trascrittasi inversa degli RNA messaggeri in cDNA a doppio filamento
-amplificazione mediante PCR con primer specifici disegnati per il cDNA relativo al messaggero per la beta-actina umana (primer dotati di estremità EcoR1 restrizione compatibili)
-gel elettroforesi per testare la buona riuscita della amplificazione e la non presenza di amplificazioni parassita, recupero con bisturi dell'amplificato, risospensione per centrifuga
-preparazione dei plasmidi pBlueScript mediante taglio con enzima di restrizione EcoR1, stessa cosa per i cDNA per ottenere estremità sticky coesive
-gel elettroforesi con controllo per testare l'apertura del vettore plasmidico circolare
-legatura overnight dei plasmidi con gli inserti preparati
-preparazione di colture batteriche di ceppi E.Coli mutanti res- e rec- sincrone alla fase logaritmica precoce della crescità in batch
-trasformazione delle cellule competenti mediante una soluzione trasformante specifica per facilitare l'ingresso di tutti i vettori nelle cellule batteriche (compresi i vettori che si sono richiusi senza inserto)
-piastraggio su terreni selettivi con ampicillina per eliminare i batteri non trasformati (pbluescript porta il genere per la resistenza all'antibiotico ampicillina)
-crescita delle colonie ricombinanti overnight
-prelievo di una colonia controllo dotata di plasmide vuoto e di 3 colonie random trasformate (?) non c'era tempo materiale per fare lo screening mediante sonde marcate radioattivamente, screening per pcr, screening mediante metodo lacZ o altro quindi il quick screening è stato fatto per gel elettroforesi.
semplificato come una storiella di cappuccetto rosso, 1 settimana di lavoro eheheh
Bisogna avere una bella testa per fare un lavoro del genere. Non ci ho capito una H ma complimenti lo stesso!
PIù che altro bisogna sapere quello di cui si aprla, oltre che a una mente adeguata :D
Io conta son riuscito a capire metà delle cose che mi hai detto ;) La mia conoscenza sul corredo genetico, enzimi, proteine, DNA e RNA, duplicazione divisione cellulare etc. si ferma all'applicazione in botanica.